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檢定/校準(zhǔn)可見分光光度計(jì)不容忽視的點(diǎn)

可見分光光度計(jì)是化學(xué)分析中常用的計(jì)量器具，它的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到測量數(shù)據(jù)的可靠真實(shí)。所以檢定/校準(zhǔn)的準(zhǔn)確是計(jì)量工作中的重點(diǎn)。本文針對可見分光光度計(jì)的檢定/校準(zhǔn)應(yīng)關(guān)注的點(diǎn)進(jìn)行論述。

可見分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡潔、使用方便的單光束分光光度計(jì)，分析測量的原理是基于郎伯-比爾定律，利用樣品對單色光的選擇吸收特性來測量和記錄其吸收程度（吸光度），對樣品進(jìn)行定性和定量分析。其原理是：當(dāng)一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時，當(dāng)某一定頻率（或波長）的可見光所具有的能級差相適應(yīng)（即△E=E2-E1=hf）時，待測物將對該頻率（波長）的可見光產(chǎn)生選擇性吸收。用可見分光光度計(jì)可以測量和記錄其吸收程度（吸光度）。由于在一定的條件下，吸光度 A與待測物質(zhì)的濃度 C及吸收池長度 L的乘積成正比，即 A=KCL，所以，在測得吸光度 A 后，可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。由上可知在實(shí)際的檢定/校準(zhǔn)過程中，關(guān)系到可見分光光度準(zhǔn)確度主要有其波長、配套的比色皿及用于檢測的計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器，關(guān)注這三個點(diǎn)對可見分光光度計(jì)的準(zhǔn)確判定起到事半功倍的作用.

（1）可見分光光度計(jì)的波長。檢定/校準(zhǔn)前對可見分光光度計(jì)的光路進(jìn)行檢查。在排除了實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件差，如磁光度計(jì)的光路進(jìn)行檢查。在排除了實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件差，如磁路容易造成光路故障等因素，將其波長置于 580nm處，狹縫置于 2nm范圍以內(nèi)，用白色的濾紙置于光路中，觀察光斑的顏色，來將波長大致調(diào)整至接近準(zhǔn)確的范圍內(nèi)。波長調(diào)整后，按照規(guī)程的要求對波長進(jìn)行檢定，當(dāng)發(fā)現(xiàn)波長超差時，可繼續(xù)調(diào)整波長，直至檢測數(shù)據(jù)符合要求。

（2）要重視對比色皿成套性的檢定。在可見分光光度計(jì)的檢定/校準(zhǔn)中，我們往往重視對其本身的檢定，而容易忽視對配套使用的比色皿成套性的檢定，這也是造成儀器分析結(jié)果偏離或超差的一個重要因素。很多可見分光光度操作人員由于對結(jié)構(gòu)及分析原理了解不夠，也容易忽視這一問題,從郎伯-比爾定律公式中不難看出，如果比色皿杯子的尺寸以及透光性發(fā)生變化，將直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。在檢定/校準(zhǔn)中，有時會遇到用戶反映檢測結(jié)果有問題，懷疑是儀器波長超差，但到現(xiàn)場經(jīng)我們認(rèn)真反復(fù)對儀器進(jìn)行檢定后，發(fā)現(xiàn)儀器各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)沒有大的問題，基本符合規(guī)程的要求，再檢查溶液的配制，也沒有發(fā)現(xiàn)較大的問題，zui后發(fā)現(xiàn)配套使用的兩個比色皿杯，從外觀上看顏色深淺不一致，經(jīng)檢定后發(fā)現(xiàn)兩個比色皿示值誤差在 10%左右，嚴(yán)重超差。經(jīng)詢問得知，造成這兩個杯子顏色不一致的原因是：操作人員習(xí)慣做法是盛放參比溶液與盛放樣品溶液的比色皿長期固定不變且不注意及時清洗，因而造成盛放樣品溶液的比色皿杯由于污染程度相對嚴(yán)重而使比色皿表面顏色變深，久而久之，兩個比色皿透射比出現(xiàn)較大的誤差。針對這一情況，我們告訴操作人員，配套使用盛放參比液比色皿與盛放樣品溶液的

比色皿不是固定不變的，可以互換使用，但必須保持清潔，用完后應(yīng)及時用蒸餾水作參比檢查其成套性，其誤差不應(yīng)超過 0.5%，這一點(diǎn)在規(guī)程上是有明確規(guī)定的，另外，比色皿透光面如遭到污染，應(yīng)使用蒸餾水緩緩沖洗，然后再用潔凈而干燥的細(xì)布或鏡頭紙輕輕擦凈，不要用毛刷或?yàn)V紙等硬性物質(zhì)擦試，以免出現(xiàn)劃痕，造成比色皿報廢，使用完畢后，一定要及時給予清洗。清洗時，可用微量濃度的酸或一定濃度有機(jī)溶劑浸泡清洗，然后用蒸餾水沖洗，zui后應(yīng)在干凈的環(huán)境中風(fēng)干，切勿用熱風(fēng)烘烤吹干，以免使吸收池形狀、尺寸發(fā)生微小變化，因而影響光程直至檢測結(jié)果。

（3）我們檢定使用的主標(biāo)準(zhǔn)器為濾光片，爭取得到更多的信息，以便靈活使用。在檢定中，遇到的大多數(shù)是進(jìn)口儀器，自動化程度高，對儀器設(shè)定好使用條件，讓操作人員按部就班地操作，不允許隨意改變設(shè)定條件，以免儀器出現(xiàn)故障，但有時會給我們檢定工作帶來一定的困難，如何在這

種情況下進(jìn)行檢定工作，就需要我們靈活地使用檢定規(guī)程。

比如在檢定中，參考結(jié)果經(jīng)常是吸光度值而不是透射比值，而我們的規(guī)程和主標(biāo)準(zhǔn)器的檢定證書按常規(guī)給出的值卻是透射比值，這就為工作帶來不便。雖然二者之間可以互相換算，但在現(xiàn)場檢定中，為了更快、更便捷地了解儀器，我們的計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)在上級部門檢定時，如果能在給出透射比標(biāo)準(zhǔn)值的同時再給出吸光度標(biāo)準(zhǔn)值更好。

結(jié)語

可見分光光度計(jì)屬于實(shí)驗(yàn)室常用計(jì)量儀器的一種，按國家檢定規(guī)程應(yīng)定期檢定，進(jìn)行量值溯源。只有熟練地操作儀器，定期檢定，才能確保儀器波長的準(zhǔn)確度，從而才能保證測定的準(zhǔn)確性，同時還能及時發(fā)現(xiàn)儀器存在的問題。